二、母种制作

（一）培养基配方

①黄豆芽500克（煮汁），白糖20克，琼脂20克，羊肚菌基脚～50克，水1升。

②黄豆芽500克（煮汁），白糖20克，琼脂20克，水1升。

③栎木屑500克（煮汁），白糖20克，琼脂20克，水1升。

④马铃薯200克（煮汁），白糖20克，琼脂20克，蛋白胨0.5克，牛肉膏0.5克，水1升。

⑤蛋白胨1克，葡萄糖20克，琼脂20克，酵母膏1克，磷酸二氢钾1克，硫酸镁1克，维生素B1，1
克，水1升。pH值自然。

    上述配方任选一组。将木屑或豆芽加水1升煮30分钟，过滤取汁，并将余下的水补足1升，
加入其它原料，煮至溶化后，按母种制作常规方法，分装于18毫米×180毫米或20毫米×200毫
米试管的1/5，塞上棉塞，使用高压灭菌锅彻底灭菌；在0.68千克压力下维持60分钟，自然冷却
至指针回到原位才可打开，放成斜面备用。

（二）菌种分离

    首先要具有食用菌专业基础知识、多年的菌种分离经验及菌丝鉴别能力，其次要购置母种
培养基、无菌接种箱、恒温培养箱、冰箱、高倍显微镜等必要设备。根据当地羊肚菌生长季
节，趁羊肚菌生长旺盛时做菌种分离工作。

           羊肚菌菌种制作: 分基内菌丝分离,孢子分离,组织分离这几种!

     基内菌丝操作过程。在羊肚菌生长的周围，可见白色菌丝充满土壤。从土壤中挑选这种菌丝容易成
功。现介绍两种土壤分离的简易方法：一种是土壤直接分离，另一种是浸提分离。土壤直接分
离法：在羊肚菌生长的地方去掉羊肚菌，取周围5厘米以内的土壤，去掉表层，把土壤放入无菌
接种箱内，然后放入试管培养基，进行接种箱空间消毒。即按接种箱每立方米空间用甲醛10毫
升，高锰酸钾5克，混合产生气体消毒，半小时后才可操作。将基脚土用接种针挑取黄豆大小一
块，迅速放到试管内的空白培养基上，每管放一块，塞上棉塞，接种后取出培养。浸提分离
法：将基脚土用无菌水稀释，澄清后用接种针蘸取少量溶液，滴到试管内的空白培养基上，塞
上棉塞后取出培养。
     孢子分离分单孢子分离与多孢子分离:用支架挂勾把成熟的鲜羊肚菌在无菌操作环境下去掉菇脚土
置三角无菌瓶中<瓶也置无菌区>24小时,取出羊肚菌把孢子用无菌水稀释,再用接种针蘸取小量孢子液划
在无菌空白<琼脂>培养基上,萌发单孢或多孢菌落转接空白培养基试管中。

用烧灼的刀具从菌柄 顶端在 火焰上方切割掉子实体头部，露出的新鲜菌柄横切面，在火焰上轻快过 2-4
下，再纵切一小部分菌盖组织, 用刀具在新鲜菌柄内侧环割菌柄新鲜菌肉组织<黄豆大小>并送入无菌平板
培养基上，于 20-30℃的温度下培养，待萌发出菌丝后，及时转接。 所述的刀具为手术刀片。 羊肚菌子实
体在切割前要基部菌柄完整，用透明胶把羊肚菌整个缠绕密封， 中间 不留空隙。

    各种方法分离后，放在12～18℃温度下培养观察。3天后培养基上萌发菌丝，每天仔细检查每支试管
的发菌及变化情况。区分和认识各类杂菌是最关键的核心技术。真正的羊肚菌菌丝最初为灰白
色，生长很快，时间长会变成棕黄色，有时会出现菌核，母种7天长满试管，原种、栽培种15天
可长满瓶底。是否分离成功，必须做栽培出菇试验，待出菇后才能准确认定是否羊肚菌的菌
种。一旦菌种分离成功，在以后的转接过程中要小心，不能再让杂菌感染，必须把好高温灭菌
关和接种消毒关，才能保证菌种质量和成活率。

（三）转接提纯

    待培养基表面余水干后才能使用，否则会被细菌感染。接种要求在接种箱内通过药物灭菌
进行，将第一代纯母种挑取黄豆大一块带菌丝的培养基，放入空白培养基上，每支母种可接10
～15支，母种只能扩种一次，不能多接或多扩，否则会影响子实体生长。

（四）培养

    接种后放在18～22℃温度下避光培养，2～3天菌丝萌发，7天可长满斜面培养基。如不使用
则放入冰箱在0～3℃温度下保存，时间最长不超过半年。

三、原种制作

（一）培养基配方

①栎木屑50%，棉籽壳30%，麦麸 15%，白糖1%，石膏1%，过磷酸钙1%，土2%，pH值自然。

②栎木屑75%，米糠或麦麸20%，白糖1%，石膏1%，过磷酸钙1%，土2%，pH值自然。

③稻草粉70%，麦麸25%，石膏1.5%，过磷酸钙1.5%，土2%，pH值自然。

④棉籽壳90%，木屑8%，土2%，pH值自然。

⑤玉米芯50%，木屑30%，米糠15%，石膏1%，过磷酸钙1%，土3%，pH值自然。

（二）操作过程

    按配方将原料混合均匀，加入清水，使含水量达65%时装瓶。装瓶要求松紧一致，装至瓶
肩，将表面压平，洗去瓶壁内外沾染的培养基，塞上棉塞，或用塑料薄膜封口。

（三）灭菌
 
   高压灭菌在0.68千克压力下维持1小时，常压灭菌在100℃温度下保持6～8小时。灭菌时间
不能过长或压力过高，否则会破坏其中养分。

（四）接种与培养

    接种在接种箱内经消毒后，每支母种可接种原种5～10瓶。接种后放在18～22℃温度下避光
培养，3天菌丝萌发吃料，10天菌丝布满培养基表面，15～20天菌丝长满瓶底。培养期间尽量避
免强光刺激，菌龄以不超过50天为好。菌丝寿命与温度有关，超过30℃以上几小时就死亡。

四、栽培种制作

（一）培养基配方

①栎木屑75%，米糠或麦麸20%，白糖1%，石膏1%，过磷酸钙1%，土2%，pH值自然。

②棉籽壳75%，麦麸20%，石膏1%，过磷酸钙1%，土3%，pH值自然。

③稻草粉75%，麦麸15%，过磷酸钙2%，土3%，pH值自然。

④玉米芯80%，米糠15%，石膏2%，过磷酸钙1%，土2%，pH值自然。

⑤农作物藤秆粉75%，米糠10%，麦麸10%，白糖1%，石膏1%，过磷酸钙1%，土2%，pH值自然。

（二）操作过程

    按配方将原料混匀后，加水调至含水量为65%，装瓶，灭菌接种，培养。操作方法同上述原
种。经18到20天菌丝长满瓶后就可用于生产栽培。